中文简体
Práve ste spustili gradientovú metódu, ktorá minulý týždeň perfektne fungovala. Kalibračné štandardy vyzerajú čisto, ale chromatogram vzorky ukazuje ďalší vrchol po 23,8 minútach. Vymeníte kolónu, pripravíte čerstvý tlmivý roztok a skontrolujete detektor. Vrchol je stále tam. Potom vymeníte vodu prechádzajúcu do mobilnej fázy a artefakt zmizne. To je realita vysokoúčinnej kvapalinovej chromatografie: čistota vody leží pod každou separáciou a keď sa zmení, mení sa s ňou aj metóda.
Čistota vody ovplyvňuje kvalitu údajov HPLC štyrmi praktickými spôsobmi: základnou stabilitou, tvarom píku, reprodukovateľnosťou retencie a životnosťou prístroja. Prítomné kontaminanty môžu byť organické molekuly, rozpustené ióny, častice alebo mikróby. Aj malé množstvo jedného druhu nečistoty môže spôsobiť následky, ktoré sú neúmerné jej koncentrácii.
Hlavné účinky čistoty vody na HPLC
V systéme HPLC je voda činidlom, nie pasívnym pozadím. Nesie pufor, rozpúšťa vzorku a prispieva k pozadiu detektora. Nečistoty vo vode sa preto presúvajú priamo do analytického signálu. V tabuľke nižšie sú zhrnuté najbežnejšie kontaminanty a ich účinky.
| Kontaminant | Príklady alebo Zdroj | Účinok v HPLC |
|---|---|---|
| Rozpustené organické látky | Humínové látky, zmäkčovadlá, zvyšky čistiacich prostriedkov, výpary rozpúšťadiel | Vrcholy duchov absorbujúce UV žiarenie, posun základnej línie, zmeny retencie |
| Anorganické ióny | Sodík, chlorid, kremičitan, stopové kovy | Zmeny vodivosti, interferencia v iónovej chromatografii a LC-MS, rozšírenie píkov súvisiace s kovom |
| Častice | Živica jemná, prach, zrazeniny | Zablokované frity, stúpajúci protitlak, opotrebovanie tesnenia čerpadla, hlučná základná línia |
| Rozpustené plyny | Kyslík, oxid uhličitý, dusík | Bubliny v detektore, skoky základnej línie, posun pH |
| Mikroorganizmy | Baktérie a biofilmy v skladovacích nádobách | Znečistenie kolóny, upchaté frity, falošné vrcholy, nestabilita metódy |
Tieto účinky nie sú len teoretické. Mikrobiálny biofilm vo vodnej nádrži môže uvoľňovať metabolity absorbujúce UV žiarenie, a akonáhle sa tento film vytvorí, jednoduchá výmena vody nemusí vyriešiť problém, kým nádrž nie je vyčistená a dezinfikovaná.
Čo vlastne znamená "HPLC-grade" a voda typu 1
Väčšina analytických metód vyžaduje vodu, ktorá spĺňa špecifikácie typu 1. V praxi to znamená, že merný odpor pri 25 stupňoch Celzia je asi 18,2 megaohm-centimetrov, vodivosť je blízko 0,055 mikrosiemens na centimeter a celkový organický uhlík je dostatočne nízky na to, aby voda nevytvárala viditeľné UV alebo MS pozadie. Samotný odpor nestačí. Potrebujete tiež poznať hladinu TOC, počet častíc a v niektorých aplikáciách hodnoty kremičitanov alebo sodíka.
Hodnota pH čistenej vody nie je užitočná špecifikácia. Ultračistá voda nemá takmer žiadnu pufrovaciu kapacitu a rýchlo absorbuje oxid uhličitý zo vzduchu, takže namerané pH okolo 5,6 jednoducho odráža rozpustený CO2. Na pH, na ktorom záleží, je pH pufrovanej mobilnej fázy, ktorú pripravíte.
Požiadavky na kvalitu vody závisia aj od detektora. UV detekcia pri 210 nm je obzvlášť citlivá na organické znečistenie, pretože tam absorbuje veľa väzieb uhlík-kyslík a uhlík-dusík. LC-MS potrebuje vodu s veľmi nízkym obsahom neprchavých nečistôt, aby sa zabránilo potlačeniu iónov a tvorbe aduktov. Odparovacie detektory sú podobne ovplyvnené neprchavou kontamináciou, pretože zvyšuje signál pozadia. Voda typu 1 je preto dobrým východiskovým bodom pre takmer každú aplikáciu HPLC.
Balená voda v kvalite HPLC môže fungovať, ale musí sa správne skladovať a manipulovať s ňou. Skontrolujte certifikát o analýze, zaznamenajte si číslo šarže a nikdy nepredpokladajte, že stará nádoba je bez biologického rastu.
Gradientová elúcia zviditeľňuje nečistoty vo vode
Nečistoty vo vode sú najviac viditeľné pri gradientových metódach. V izokratickom chode môže kontaminant absorbujúci UV jednoducho trochu zvýšiť základnú líniu. V gradiente začína vodná frakcia vysoko a frakcia organického rozpúšťadla časom stúpa. Kontaminanty môžu byť zadržané na hlave kolóny a potom eluované, keď sa organický obsah zvyšuje. To vytvára duchovné vrcholy a driftujúcu základnú líniu, ktorá môže interferovať s integráciou a kvantifikáciou.
Preto je slepý gradient jednou z najjednoduchších kontrol kvality vody. Spustite svoj presný gradient bez vstreknutia vzorky. Ak sa v slepom pokuse objavia píky, mobilná fáza je podozrivá.
Denné návyky, ktoré chránia čistotu vody
Čistá voda nezostane čistá náhodou. Nasledujúce návyky predchádzajú najčastejším problémom v praxi HPLC.
- Používajte vodu z čistiaceho systému s čerstvými kazetami, funkčnú UV lampu a pravidelnú dezinfekciu.
- Zachyťte vodu do čistej nádoby s uzáverom. Počas prevádzky systému nenechávajte nádobu otvorenú.
- Neskladujte vodu niekoľko dní. Mobilnú fázu pripravte s čerstvou vodou vždy, keď je to možné, v ten istý deň.
- Vyhnite sa pridávaniu čerstvej vody do čiastočne naplnenej nádržky. Namiesto dopĺňania vymeňte obsah nádržky.
- Spustite slepý gradient pri vlnovej dĺžke použitej na analýzu a zaznamenajte výsledok.
- Zaznamenajte odpor, TOC a dátum odberu vody vo svojich analytických záznamoch.
Pre laboratóriá, ktoré používajú balenú vodu, platia rovnaké pravidlá. Skontrolujte dátum spotreby, nádobu ihneď po použití uzavrite a nepoužitú vodu z kadičky nevracajte do fľaše.
Aditíva premenia problém s vodou na problém metódy
Mobilné fázy zriedka obsahujú len vodu. Tlmivé soli, kyseliny, iónové párové činidlá a niektoré špecializované modifikátory sa pridávajú v relatívne nízkych koncentráciách. Ak voda obsahuje stopové nečistoty absorbujúce UV žiarenie, tieto nečistoty nemusia zmeniť kapacitu pufra, ale stále sa môžu objaviť v signáli detektora.
Iónové kvapaliny sa niekedy používajú ako modifikátory mobilnej fázy na zlepšenie tvaru piku alebo selektivity. Keď si vyberiete jeden, mal by platiť rovnaký štandard čistoty. napr. 1-etyl-3-metylimidazoliumtetrafluórborát je bežná iónová kvapalina pre chromatografické štúdie. Mal by sa rozpustiť vo vode, ktorá už spĺňa špecifikácie typu 1; inak sa aditívum stáva ďalším zdrojom kontaminácie. Ak chcete pochopiť separačné vlastnosti týchto zlúčenín, naše prehľad o tom, ako fungujú iónové kvapaliny v separačných procesoch pokrýva praktické premenné.
CAS:143314-16-3 -1 -Etyl-3-metylimidazolium Tetrafluórborátové kvapaliny Dodávateľ Technológia Ldet je čínska zákazka CAS:143314-16-3 -1 -Etyl-3-metylimidazolium Tetrafluórborátové kvapaliny dodávatelia a 1 -etyl-3-metylim... Zobraziť produkt → Čistota začína u dodávateľa
V Zhejiang Ldet vyrábame iónové kvapaliny a špeciálne chemikálie. Z výroby vieme, že stopová nečistota vo východiskovom materiáli môže zmeniť následný výkon. To je dôvod, prečo pred uvoľnením kontrolujeme obsah vody, zvyškové halogenidy a UV správanie. Rovnaká disciplína patrí do laboratória HPLC: vyberte si materiály, ktoré majú zdokumentované špecifikácie. napr. 1-butyl-3-metylimidazoliumtetrafluórborát je k dispozícii s údajmi o čistote, ktoré vám umožňujú posúdiť, či je kompatibilný s vašou metódou detekcie.
CAS: 174501-65-6-1-Butyl-3-metylimidazoliumtetrafluórborát Kvapaliny Dodávatelia Technológia Ldet je čínska zákazková CAS: 174501-65-6-1-Butyl-3-metylimidazolium tetrafluórborát dodávatelia tekutín a 1-butyl-3-metylimid... Zobraziť produkt → Čo je potrebné skontrolovať na certifikáte analýzy
- Zvyškový obsah halogenidov, pretože halogenidy môžu ovplyvňovať separácie iónovej výmeny a koróziu.
- Obsah vody, pretože voda mení účinnú koncentráciu aditíva.
- UV spektrum alebo UV cutoff, takže môžete predpovedať absorbanciu pozadia.
- Konzistencia medzi jednotlivými šaržami, pretože nová šarža by nemala ticho zmeniť vašu metódu.
Ak potrebujete pomoc pri priraďovaní materiálu k metóde, môžete prediskutujte údaje o čistote a vlastné požiadavky s naším technickým tímom .
Upravujte vodu ako súčasť metódy
Čistota vody v HPLC nie je jednorazové nastavenie. Je to denná premenná, ktorá sa môže meniť podľa sezóny, skladovacej fľaše a stavu čistiaceho systému. Použite vodu typu 1, potvrďte TOC a merný odpor, zaobchádzajte s ňou správne a vyberte si aditíva s sledovateľnosťou. V metóde postavenej na nanogramoch analytu voda nikdy nie je „len voda“.
